博格隆Diamond Protein L亲和层析填料纯化抗体片段案例分享
1.背景介绍
Protein L
蛋白L（Protein L）是一种从大型消化链球菌（Peptostreptococcus magnus）中分离到的一种多结构域细胞壁蛋白，与抗体的 kappa 轻链的可变区域相互作用，特别是 K1、K3 和 K4 轻链，使其能够与大约 67% 的人免疫球蛋白和 99% 的小鼠免疫球蛋白结合[1]。
Diamond Protein L亲和层析填料
Diamond Protein L是将 Protein L 配基同高刚性琼脂糖基架偶联后制成的一种新型亲和层析介质。相较于常规介质，高刚性琼脂糖基架流速更快，反压更低。Protein L 配基与抗体 kappa 轻链的可变区有很强的亲和性，所以博格隆Diamond Protein L亲和层析填料适用于从大批量细胞培养液中捕获各种不同大小的抗体片段，如 F(ab‘)2、Fab、单链可变片段 （scFv）和半抗。
Fig. 1 抗体IgG和抗体片段示意图
博格隆Diamond Protein L亲和层析填料的主要特性：
- 高刚性琼脂糖基架：高流速，可提高生产效率
- 高特异性的kappa轻链：可高效捕获广泛选择的抗体和抗体片段
- 高结合载量：能减少工艺时间和介质使用量，降低生产成本
博格隆Diamond Protein L亲和层析填料技术参数：
+颗粒大小呈正态分布，平均颗粒大小是填料体积分布累计的中值粒径
++线性流速100cm/h，柱高10cm，缓冲液条件：20mM PB、0.15M NaCl，pH7.2
+++2%苯甲醇仅用于国外运输或者客户指定
2.实际应用案例—半抗亲和层析
- 层析填料：Diamond Protein L
- 样品和上样量：某半抗，30mg/mL填料
- 平衡缓冲液：20mM Tris-HCl，0.15M NaCl，pH7.2
- 洗脱缓冲液：50mM Gly-HCl，pH2.9
- CIP缓冲液: 15m M NaOH
Fig. 2 Diamond Protein L亲和层析图谱
Fig. 3 Diamond Protein L亲和层析纯化结果
使用Tips
缓冲液选择：
- 结合缓冲液：通常采用中性缓冲液，如：20mM PB 0.15M NaCl pH7.2
- 洗脱缓冲液：采用低 pH 缓冲液，如：0.1M 柠檬酸钠 pH2.0-3.5
提高洗脱产品纯度
在洗脱步骤可以通过pH线性梯度洗脱，优化出合适的洗脱pH范围。对于具有挑战性的抗体或抗体片段纯化中通过优化洗脱缓冲液浓度，可以进一步去除洗脱产品中的聚集体等产品相关杂质[2]。
在位清洗
如果洗脱产品收率异常，建议在 CIP 之前应先进行再生。在用 NaOH 进行 CIP 之前，建议先用中性 pH 溶液平衡层析柱，避免低pH 缓冲液与高pH NaOH 溶液直接接触可能导致柱内温度升高。
3.相关产品信息
Fig. 4 Diamond Protein L亲和层析填料产品订购表
Fig. 5 Diamond Protein L亲和层析预装柱产品订购表
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参考文献：
[1] Serene W. Chen, Darryl Tan, et.al (2020) Investigation of the effect of salt additives in Protein L affinity chromatography for the purification of tandem single-chain variable fragment bispecific antibodies, mAbs
[2] Chen Chen, Tetsuya Wakabayashi et.al(2019) Controlled conductivity at low pH in Protein L chromatography enables separation of bispecific and other antibody formats by their binding valency, mAbs
关于博格隆
博格隆成立于2008年，是一家专注于为分离纯化提供高质量层析介质的高新技术企业，是中国较早具备大规模生产分离纯化介质能力的企业之一。博格隆所提供的产品涵盖各类分离纯化介质、预装柱、实验室及工业生产级空柱、微载体，同时提供分离纯化工艺开发服务及填料定制。
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